[交流] 有人做過Northern blot嗎??

cheanpen

我計劃年後要做這個實驗,不過,很不好意思的是,我們實驗室裡面,沒有任何一個人做過,因為,以前我們都只做材料方面的測試..B)B)

我大概知道整個實驗要怎麼進行,但就是沒真正做過.所以,我想問一下各位朋友--
      你覺得這個實驗會不會很囉唆,很繁雜呀??容不容易上手呀??失敗率高嗎??

我想先有個心理準備..

vonjeff

Northern blot還蠻好做的，一般來講大概3-4天，看你的RNA量多或少
labelling那些reagent可以買就買，自己配很麻煩. dextran, salmon sperm DNA, SSC那些就自己來吧.  
失敗率大概跟你第一次做western差不多? 多做幾次就可以抓到祕訣.
建議你到bbs上的biology / biotech板發問.可能會有比較多回應.

leollc

Originally posted by cheanpen at 2005-2-5 10:51 PM:
我計劃年後要做這個實驗,不過,很不好意思的是,我們實驗室裡面,沒有任何一個人做過,因為,以前我們都只做材料方面的測試..B)B)

我大概知道整個實驗要怎麼進行,但就是沒真正做過.所以,我想問一下各位朋友--
      你覺得這個實驗會不會很囉唆,很繁雜呀??容不容易上手呀??失敗率高嗎??

我想先有個心理準備..

我還沒做過，不過也快了B)

這在我們lab算是很普通的實驗，所以以我看實驗室其他成員做過的感覺，比Western blot複雜，而且難度高出很多。Western blot我一天就能搞定，但是Nothern blot我看其他人操作至少要2天。
我的經驗是第一次做就寫一份實驗流程，然後做實驗時帶在身邊，不確定就看一下，可以降低失敗的機會。
btw，假設您不是經常接觸RNA的實驗，我還是多嘴提一下，RNA sample是很容易degrade的東西，請務必小心處理，因為RNase是很討厭的東西，他無所不在，又很難幹掉。如果您有使用一些mini-prep kit或是QIAGEN的DNA extraction kit，這些kit中的buffer都有添加RNase。所以可能的話，盡量在比較乾淨的環境作這個實驗。

liaolc

可怕，PIL該不會要開分生專區了吧，我的碩士論文是用RAPD做族群分析，算是很簡易的技術。對跑野外出身的我來說，學分生技術大概也有一整年處於看天書的狀態